豬偽狂犬病病毒野毒株檢測(cè)試劑盒說明書

產(chǎn)品名稱：豬偽狂犬病病毒野毒株檢測(cè)試劑盒說明書

規(guī)    格： 50T
檢測(cè)方法： 實(shí)時(shí)熒光 PCR

保存方式： 2~8℃

有 效 期： 1年

產(chǎn)    地： 中國(guó)

用    途： 僅用于科研實(shí)驗(yàn)

訂購(gòu)流程：豬偽狂犬病病毒野毒株檢測(cè)試劑盒

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1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿，勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中；
液體標(biāo)本：取適量標(biāo)本13000rpm離心2min，棄上清。
1.2 DNA提取

1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入40ul 核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13,000 rpm離心5分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)代檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N（N=樣本數(shù)+1

管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照），體系配制如下表：

試劑

WSSV 反應(yīng)液

酶液

用量（樣本數(shù)為N）

20μl

1μl

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl，加入相應(yīng)的

反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；

5. 結(jié)果分析判定

結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線（baseline）：一般情況下，對(duì)ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle，對(duì)PE5700設(shè)為3-15cycle,對(duì)MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對(duì)基線適當(dāng)調(diào)整。
設(shè)置閾值（threshold）:以閾值線剛超過陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線（無規(guī)則的噪音線）的至高點(diǎn)。
結(jié)果判斷
陽(yáng)性：檢測(cè)樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期；
可疑：檢測(cè)樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復(fù)一次實(shí)驗(yàn)，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期，為陽(yáng)性，否則為陰性；
陰性：檢測(cè)不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解析

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，試劑污染，標(biāo)本交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線無對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期或無Ct值顯示；
陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，且Ct值≤32;
以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。