小反芻獸疫病毒酶聯抗體檢測試劑盒使用方法及注意事項

檢測原理

   本試劑盒由預包被小反芻病毒重組蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本中小反芻病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有小反芻病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶標結合物反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有小反芻病毒抗體。

試劑盒組成

儲存及有效期

2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

適用儀器

含450nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

樣品準備

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋（如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中，混勻）陰性、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液)。

檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性、陽性對照各1孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃溫箱孵育30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加250ul工作洗滌液，用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去，重復洗滌5次，每次洗滌后需拍干液體。

6.每孔加酶標記物100μl，置37℃避光反應30分鐘。

7.甩去孔內液體，每孔加250ul工作洗滌液，用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去，重復洗滌5次，每次洗滌后需拍干液體。

8.根據樣本數量將顯色液A與顯色液B按等體積比例混勻配置為底物工作液，現配現用。每孔加100ul，置37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液100μl，混勻，于450nm 測定各孔吸光值（OD值），

參考值

實驗正常的情況下，陽性對照OD-陰性對照OD＞0.2。

檢驗結果的解釋

1. S/P＝(樣本OD-陰性對照OD)/(陽性對照OD-陰性對照OD)。

2. S/P≥0.4時結果判讀為陽性。

3. 0.2＜S/P＜0.4時結果考慮可能存在抗體效價不足或疑似感染。

4. S/P＜0.2時結果判讀為陰性。

試驗方法的局限性

1. 本試劑盒僅作為定性檢測羊血清、血漿中小反芻病毒抗體的粗略評估。

2. 本試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗。

注意事項

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。