布病虎紅平板凝集抗原的使用方法及注意事項

虎紅平板凝集試驗（RBT，Rose Bengal Test）是國際貿易中牛、羊、豬布魯氏菌病檢測的標準試驗，在我國也用于人布魯氏菌病監測的初篩。抗原是經培養滅活后，離心收集菌體用虎紅染料染色后懸浮于乳酸緩沖液中制成。由于所用的抗原是酸性（ PH3.6-3.9 ）帶色的抗原，該抗原與被檢血清作用時能抑制血清中的IgM類抗體的凝集活性、檢查的抗體是IgG類，因此提高了反應的特異性。該方法靈敏度高，操作方便，檢測快速且價格便宜，適于動物群體布魯氏菌病的普查。

布魯氏菌虎紅平板凝集試驗具體操作方法如下:

一、材料準備

1、布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原、布魯氏菌標準陽性血清、布魯氏菌陰性血清。

2、受檢血清應新鮮,無明顯蛋白凝塊,無溶血。

3、潔凈的玻片或玻璃板。在其上劃分成4cm2的方格。

4、微量移液器及無菌吸頭。

5、干凈牙簽或火柴桿。

二、操作方法

1、在玻璃板各方格標記受檢血清編號,然后加入相應的血清25μL（動物布魯氏菌病診斷技術GB/ 18646-2018）。

2、在各待檢血清旁滴加虎紅抗原25μL。

3、用滅菌牙簽類小棒快速混勻血清和抗原，涂成2cm直徑的圓形，于4分鐘內觀察結果。

三、結果判定

在標準陰性血清不出現凝集、標準陽性血清出現凝集時，試驗成立，方可對受檢血清進行判定。凡出現肉眼可見凝集現象者（“+"以上反應）判為陽性。

虎紅平板凝集試驗判定標準：

“—"無凝集,呈均勻粉紅色

“+"稍能查到凝集,稍有卷邊形成,凝集物間液體呈紅色。

“++"形成較明顯卷邊,凝集塊間液體稍清亮。

“+++"凝集反應較強,液體較清亮。

“++++"凝集塊呈菌叢狀,凝塊間液體明顯清亮。

四、注意事項

布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原儲藏溫度:2-8℃，使用前需充分搖勻，務必恢復至室溫或18度以上后再檢測。

試驗應設標準陰、陽性血清對照。